飼料中水分的測(cè)定方法

1、適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于測(cè)定配合飼料和單一飼料中水分含量，但用作飼料的奶制品，動(dòng)物和植物油脂，礦物質(zhì)除外。

2、原理: 試樣在105±2℃烘箱內(nèi)，在大氣壓下烘干，直至恒重，逸失的重量為水分

3、儀器設(shè)備

實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。

分樣篩：孔徑0.45毫米（40目）

分析天秤：感量0.0001克。

電熱式恒溫烘箱：可控制溫度為105±2℃。

稱(chēng)樣皿：玻璃或鋁質(zhì)，直徑40毫米以上，高25毫米以下。

干燥器：用氯化鈣（干燥試劑）或變色硅膠作干燥劑。

4、試樣的選取和制備

選取有代表性的試樣，其原始樣量應(yīng)在1000g以上用四分法將原始樣品縮減至500g，風(fēng)干后粉碎至40目，再用四分法縮至200g，裝入密封容器，放陰涼干燥處保存。如試樣是多汁的鮮樣，或無(wú)法粉碎時(shí)應(yīng)預(yù)先干燥處理，稱(chēng)取試樣200~300g，在105℃烘箱中烘15分鐘，立即降至65℃，烘干5~6小時(shí)，取出后，在室內(nèi)空氣中冷卻4小時(shí)，稱(chēng)重，即得風(fēng)干試樣。

5、測(cè)定步驟

潔凈稱(chēng)樣皿，在105±2℃烘箱中烘1小時(shí)，取出在干燥器中冷卻30分鐘，稱(chēng)準(zhǔn)至0.0002克，再烘干30分鐘，同樣冷卻，稱(chēng)重，直至兩次重量之差小于0.0005克為恒重。

用已恒重稱(chēng)樣皿稱(chēng)取兩份平行樣，每份2~5克含水量0.1克以上，樣品厚度4毫米以下，準(zhǔn)確至0.0002克，不蓋稱(chēng)樣皿蓋，在105±2℃烘箱中烘烘3小時(shí)，以溫度到達(dá)105℃開(kāi)始計(jì)時(shí)，取出蓋好稱(chēng)樣皿蓋，在干燥器中冷卻30分鐘，稱(chēng)重。

再同樣烘干1小時(shí)，冷卻，稱(chēng)重，直至兩次稱(chēng)重之重量差小于0.002克。

測(cè)定結(jié)果的計(jì)算

計(jì)算公式：水分（%）=（W1—W2）/（W1—W0）×100

式中：W1—105℃烘干前的試樣及稱(chēng)樣皿的重量，g；

W2—105℃烘干后試樣及稱(chēng)樣皿的重量，g；

W0—已恒重的稱(chēng)樣皿的重量，g。

重復(fù)性

每個(gè)試樣，應(yīng)取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果，兩個(gè)平行樣測(cè)定值相差不得超過(guò)0.2%，否則重做。

6、注意事項(xiàng)

1）如果試樣進(jìn)行過(guò)預(yù)先干燥處理，應(yīng)按下式計(jì)算原來(lái)試樣的所含水分總量：

原試樣總水分（%）=預(yù)干燥減重（%）+[100—預(yù)干燥減重（%）] ×風(fēng)干試樣水分（%）

2）某些含脂肪高的樣品，烘干時(shí)間長(zhǎng)反而增重，乃脂肪氧化所致，應(yīng)以增重前那次重量為準(zhǔn)。

3）含糖分高的易分解或易焦化試樣，應(yīng)使用減壓干燥法（70℃，600mm汞柱以下，烘干5小時(shí)）測(cè)定水份。

試樣經(jīng)灼燒完全后，余下的殘留物質(zhì)（如氧化物和鹽）稱(chēng)為灰分。灰分有水溶性與水不溶性，酸溶性、酸不溶性。水溶性灰分大部分是鉀、鈉、鈣、鎂等氧化物和可溶性鹽，水不溶性灰分除泥沙外，還有鐵、鋁等的氧化物和堿土金屬的堿式磷酸鹽。酸不溶性灰分大部分為污染摻入的泥沙和原來(lái)存在于動(dòng)植物組織中經(jīng)灼燒成的二氧化硅。

5.1 測(cè)定原理

飼料中灰分的測(cè)定一般采用灰化法。將試樣在550℃燒灼，使構(gòu)成飼料有機(jī)物的主要元素C、N、H、等氧化，所余殘?jiān)达暳现兴鞣N礦物元素的氧化物、氯化物及碳酸鹽，以及混雜在飼料中粘土、砂粒等，稱(chēng)為粗灰分。

5.2 儀器設(shè)備

樣品粉碎機(jī)，分析天平（感量0.0001g），電爐，坩堝鉗，馬福爐，瓷坩堝(50ml)，干燥器（變色硅膠作干燥劑）、40目分樣篩。

5.3 試劑及配制：0.5%氯化鐵墨水溶液（稱(chēng)0.5g氯化鐵溶于100ml藍(lán)墨水中）

5.4 測(cè)定步驟

5.4.1 將帶蓋坩堝洗凈烘干后，用鋼筆蘸0.5%氯化鐵墨水溶液編號(hào)。

5.4.2 將坩堝和蓋一起放入馬福爐，在550℃±20℃下灼燒30min，稱(chēng)重再重復(fù)灼燒，冷卻、稱(chēng)重，直至兩次重量之差小于0.0005g為恒重量。

5.4.3 在已知重量的坩堝中稱(chēng)取2g左右試樣（不超過(guò)坩堝容量的一半，灰分重量應(yīng)在0.05g以上），在電爐上低溫碳化至無(wú)煙為止。

5.4.4 炭化后將坩堝移入馬福爐中，于550℃下灼燒3h，使全部樣品變成灰白色或紅棕色（含有錳）。待灰化結(jié)束后，待爐溫降至200℃下時(shí)打開(kāi)爐門(mén)，將坩堝取出于空氣中冷卻1min.，放入干燥器中冷卻30min，稱(chēng)重。再同樣灼燒1h，冷卻，稱(chēng)重，直至兩次重量之差小于0.001g 為恒重量。

5.5 結(jié)果計(jì)算

5.5.1 計(jì)算公式：

粗灰分=(W2-W0)/(W1-W0)*100%

式中：W0為已恒重量空坩堝重（g）；W1為坩堝加試樣重（g）；W0為灰化后坩堝加灰分重(g)。

5.5.2 重復(fù)性：每個(gè)試樣應(yīng)取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。

粗灰分含量在10%以上，允許相對(duì)偏差為0.5%；粗灰分含量在5-10%以上，允許相對(duì)偏差為1%；粗灰分含量在5%以下，允許相對(duì)偏差為5%。

5.6 注意事項(xiàng)

5.6.1 樣品開(kāi)始炭化時(shí)，應(yīng)打開(kāi)部分坩堝蓋，便于氣流流通；溫度應(yīng)逐漸上升，防止火力過(guò)大而使部分樣品顆粒被逸出的氣體帶走。

5.6.2 為了避免樣品氧化不足，不應(yīng)把樣品磨得太細(xì)，壓得過(guò)緊，樣品應(yīng)松松地放在坩堝內(nèi)。

5.6.3 灼燒溫度不宜超過(guò)600℃，否則會(huì)引起磷、硫等鹽的揮發(fā)。

5.6.4 灼燒殘?jiān)伾c試樣中各元素含量有關(guān)，含鐵高時(shí)為紅棕色，含錳高為淡藍(lán)色。但有明顯黑色炭粒時(shí)，為炭化不完全，應(yīng)延長(zhǎng)灼燒時(shí)間。

飼料中純蛋白質(zhì)（真蛋白）的測(cè)定

一、測(cè)定原理

飼料蛋白質(zhì)經(jīng)沸水提取并在堿性溶液中被硫酸銅沉淀。過(guò)濾和洗滌后，可將純蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)含氮物分離，再用凱氏定氮法測(cè)定沉淀物中的蛋白質(zhì)含量。

二、儀器設(shè)備

（1）燒杯：200ml

（2）定型濾紙

（3）其他設(shè)備與粗蛋白質(zhì)測(cè)定法相同

三、試劑與配制

（1）100g.L-1硫酸銅溶液；分析純硫酸銅（5水硫酸銅）10g溶于100ml水中

（2）25g.L-1氫氧化鈉溶液：將2.5g分析純氫氧化鈉溶于100ml水中

（3）10g.L-1氯化鋇溶液：1g氯化鋇溶于100ml水中

（4）2mol.L鹽酸溶液

（5）其他試劑與粗蛋白質(zhì)測(cè)定法相同

四、測(cè)定步驟

準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣1g左右（精確至0.0001g）置于200ml燒杯中，加50ml水中，加熱至沸。

加入20ml硫酸銅溶液，20ml氫氧化鈉溶液，用玻璃棒充分?jǐn)嚢?，放?h以上。用定性濾紙過(guò)濾，然后用60~80攝氏度熱水洗滌沉淀5或6次，用氯化鋇溶液5滴和鹽酸溶液1滴檢查濾紙，直至不生成白色硫酸鋇沉淀為止。將沉淀和濾紙放在65攝氏度烘箱干燥2h，然后全部轉(zhuǎn)移到凱氏燒瓶中，按半微量凱氏定氮法進(jìn)行氮的測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)參照采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO 6490/2－1983《動(dòng)物飼料——鈣含量測(cè)定——原子吸收分光光度法》。

　　1　主題內(nèi)容與適用范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用原子吸收分光光度法和滴定法測(cè)定食品中鈣。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種食品中鈣的測(cè)定。

　　第一篇　原子吸收分光光度法

　　2　原理

　　樣品經(jīng)濕消化后，導(dǎo)進(jìn)原子吸收分光光度計(jì)中，經(jīng)火焰原子化后，吸收422.7nm的共振線，其吸收量與含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。

　　3　試劑

　　要求使用往離子水，優(yōu)級(jí)純?cè)噭?/p>

　　3.1　鹽酸(GB 622)。

　　3.2　硝酸(GB 626)。

　　3.3　高氯酸(GB 623)。

　　3.4　混合酸消化液：硝酸與高氯酸比為4∶1。

　　3.5　0.5N硝酸溶液：量取45mL硝酸，加往離子水并稀釋至1000mL。

　　3.6　2%氧化鑭溶液：稱(chēng)取25g氧化鑭(純度大于99.99%)，加75mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加往離子水稀釋至刻度。

　　3.7　鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱(chēng)取1.2486g碳酸鈣(純度大于99.99%)，加50mL往離子水，加鹽酸溶解，移進(jìn)1000mL容量瓶中，加2%氧化鑭稀釋至刻度。貯存于聚乙烯瓶?jī)?nèi)，4℃保存。此溶液每毫升相當(dāng)于500μg鈣。

　　3.8　鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液：鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制見(jiàn)表1。

　　表1　鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液配制

　　鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液配制后，貯存于聚乙烯瓶?jī)?nèi)，4℃保存。

　　4　儀器與設(shè)備

　　所用玻璃儀器均以硫酸－重鉻酸鉀洗液浸泡數(shù)小時(shí)，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反復(fù)沖洗，最后用往離子水沖洗曬干或烘干，方可使用。

　　4.1　實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。

　　4.2　原子吸收分光光度計(jì)。

　　5　操縱步驟

　　5.1　樣品處理

　　5.1.1　樣品制備

　　微量元素分析的樣品制備過(guò)程中應(yīng)特別留意防止各種污染。所用設(shè)備如電磨、絞肉機(jī)、勻漿器、打壞機(jī)等必須是不銹鋼制品。所用容器必須使用玻璃或聚乙烯制品，做鈣測(cè)定的樣品不得用石磨研碎。濕樣(如蔬菜、水果、鮮魚(yú)、鮮肉等)用水沖洗干凈后，要用往離子水充分洗凈。干粉類(lèi)樣品(如面粉、奶粉等)取樣后立即裝容器密封保存，防止空氣中的灰塵和水分污染。

　　5.1.2　樣品消化

　　精確稱(chēng)取均勻樣品干樣0.5～1.5g(濕樣2.0～4.0g，飲料等液體樣品5.0～10.0g)于250mL高型燒杯，加混合酸消化液20～30mL，上蓋表皿。置于電熱板或電沙浴上加熱消化。如未消化好而酸液過(guò)少時(shí)，再補(bǔ)加幾毫升混合酸消化液，繼續(xù)加熱消化，直至無(wú)色透明為止。加幾毫升往離子水，加熱以除往多余的硝酸。待燒杯中的液體接近2～3mL時(shí)，取下冷卻。用往離子水洗并轉(zhuǎn)移于10mL刻度試管中，加往離子水定容至刻度(測(cè)鈣時(shí)用2%氧化鑭溶液稀釋定容)。

　　取與消化樣品相同量的混合酸消化液，按上述操縱做試劑空缺試驗(yàn)測(cè)定。

　　5.2　測(cè)定

　　將鈣、標(biāo)準(zhǔn)使用液分別配制不同濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，見(jiàn)表2，測(cè)定操縱參數(shù)見(jiàn)表3。

　　表2　不同濃度系列標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的配制方法

　　（圖略）

　　表3　測(cè)定操縱參數(shù)

　?。▓D略）

　　其他實(shí)驗(yàn)條件：儀器狹縫、空氣及乙快的流量、燈頭高度、元素?zé)綦娏鞯染词褂玫膬x器說(shuō)明調(diào)至最佳狀態(tài)。

　　將消化好的樣液、試劑空缺液和各元素的標(biāo)準(zhǔn)濃度系列分別導(dǎo)進(jìn)火焰進(jìn)行測(cè)定。

　　5.3　計(jì)算

　　5.3.1　標(biāo)準(zhǔn)曲線法

　　以各濃度系列標(biāo)準(zhǔn)溶液與對(duì)應(yīng)的吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。鈣標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。它的線性相關(guān)系數(shù)為0.9996。

　　（圖略）

　　測(cè)定用樣品液及試劑空缺液由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出濃度值(c及c0，再按式(1)計(jì)算。

　　式中：X——樣品中元素的含量，同mg/100g；

　　c——測(cè)定用樣品中元素的濃度(由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出)，μg/mL；

　　c0——試劑空缺液中元素的濃度(由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出)，μg/mL；

　　V——樣品定容體積，mL；

　　f——稀釋倍數(shù)；

　　m——樣品質(zhì)量，g；

　?。▓D略）

　　5.3.2　回回方程法

　　由各元素標(biāo)準(zhǔn)稀釋液濃度與對(duì)應(yīng)的吸光度計(jì)算出回回方程(也可以輸進(jìn)計(jì)算器得出回回方程)，計(jì)算見(jiàn)式(2)。

　　c＝ay＋b……………………………………………(2)

　　式中：c——測(cè)定用樣品中元素的濃度(可由計(jì)算器直接得出，μg/mL)；

　　a——曲線斜率；

　　y——元素的吸收度；

　　b——曲線的截距。

　　由回回方程或計(jì)算器得出測(cè)定樣液及試劑空缺液的濃度后，再由式(3)計(jì)算。

　　式中各字母的含義同曲線法說(shuō)明。

　　5.3.3　結(jié)果的重復(fù)性

　　同實(shí)驗(yàn)室平行測(cè)定或連續(xù)兩次測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性鈣小于10%。

　　最低檢測(cè)限：鈣0.1μg。

　　第二篇　滴定法(EDTA法)

　　6　原理

　　鈣與氨羧絡(luò)合劑能定量地形成金屬絡(luò)合物，其穩(wěn)定性較鈣與指示劑所形成的絡(luò)合物為強(qiáng)。在適當(dāng)?shù)膒H值范圍內(nèi)，以氨羧絡(luò)合劑EDTA滴定，在達(dá)到當(dāng)量點(diǎn)時(shí)，EDTA就自指示劑絡(luò)合物中奪取鈣離子，使溶液呈現(xiàn)游離指示劑的顏色(終點(diǎn))。根據(jù)EDTA絡(luò)合劑用量，可計(jì)算鈣的含量。

　　7　試劑

　　要求使用往離子水，優(yōu)級(jí)純?cè)噭?/p>

　　7.1　1.25mol/L氫氧化鉀溶液：精確稱(chēng)取71.13g氫氧化鉀，用往離子水稀釋至1000mL。

　　7.2　1%氰化鈉溶液：稱(chēng)取1.0g氰化鈉，用往離子水稀釋至100mL。

　　7.3　0.05mol/L檸檬酸鈉溶液：稱(chēng)取14.7g檸檬酸鈉(Na3C6H5O7·2H2O)，用往離子水稀釋至1000mL。

　　7.4　混合酸消化液：硝酸(GB 626)與高氯酸(GB 623)比為4∶1。

　　7.5　EDTA溶液：精確稱(chēng)取4.50g EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)，用往離子水稀釋至1000mL，貯存于聚乙烯瓶中，4℃保存。使用時(shí)稀釋10倍即可。

　　7.6　鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱(chēng)取0.1248g碳酸鈣(純度大于99.99%，105～110℃烘干2h)，加20mL往離子水及3mL 0.5mol/L鹽酸溶解，移進(jìn)500mL容量瓶中，加往離子水稀釋至刻度，貯存于聚乙烯瓶中，4℃保存。此溶液每毫升相當(dāng)于100μg鈣。

　　7.7　鈣紅指示劑：稱(chēng)取0.1g鈣紅指示劑(C21O7N2SH14)，用往離子水稀釋至100mL，溶解后即可使用。貯存干冰箱中可保持一個(gè)半月以上。

　　8　儀器與設(shè)備

　　所有玻璃儀器均以硫酸－重鉻酸鉀洗液浸泡數(shù)小時(shí)，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反復(fù)沖洗，最后用往離子水沖洗曬干或烘干，方可使用。

　　8.1　實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器：高型燒杯(250mL)，微量滴定管(1或2mL)，堿式滴定管(50mL)，刻度吸管(0.5～1mL)，試管等。

　　8.2　電熱板：1000～3000W，消化樣品用。

　　9　樣品制備

　　同第一篇。

　　10　操縱步驟

　　10.1　樣品消化

　　同第一篇。

　　10.2　測(cè)定

　　10.2.1　標(biāo)定EDTA濃度

　　吸取0.5mL鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液，以EDTA滴定，標(biāo)定其EDTA的濃度，根據(jù)滴定結(jié)果計(jì)算出每毫升EDTA相當(dāng)于鈣的毫克數(shù)，即滴定度(T)。

　　10.2.2　樣品及空缺滴定

　　吸取0.1～0.5mL(根據(jù)鈣的含量而定)樣品消化液及空缺于試管中，加1滴氰化鈉溶液和0.1mL檸檬酸鈉溶液，用滴定管加1.5mL 1.25mol/L氫氧化鉀溶液，加3滴鈣紅指示劑，立即以稀釋10倍EDTA溶液滴定，至指示劑由紫紅色變藍(lán)為止。

　　10.3　計(jì)算

　　樣品中該元素的含量按式(4)計(jì)算：

　　式中：X——樣品中元素含量，mg/100g；

　　T——EDTA滴定度，mg/mL；

　　V——滴定樣品時(shí)所用EDTA量，mL；

　　V0——滴定空缺時(shí)所用EDTA量，mL；

　　f——樣品稀釋倍數(shù)；

　　m——樣品稱(chēng)重量，g。

　　11　結(jié)果的重復(fù)性

　　同實(shí)驗(yàn)室平行測(cè)定或連續(xù)兩次測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性小于10%。

　　本方法的檢測(cè)范圍：5～50μg。